Бюллетень
Викторина
Глава
Диплом
Доклад
Учебно-методический комплекс по дисциплине «Основы микробиологии»
 Скачать 472.78 Kb.
|
| Тема1.2. Физиология микроорганизмов Основные понятия и термины по теме: белки, жиры, углеводы, обмен веществ (питание), аутотрофы, гетеротрофы, анаэробы, аэробы, факультативные аэробы и анаэробы. Питательные среды. План изучения темы 1.Химический состав микроорганизмов, обмен веществ, дыхание, выделение токсинов. Размножение и рост бактерий. 2.Микроскопические, культуральные и биохимические методы исследования. Краткое изложение теоретических вопросов: ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ БАКТЕРИЙ По химическому составу микроорганизмы мало отличаются от других живых клеток. Вода составляет 75-85% , в ней растворены химические вещества. Сухое вещество 15-25%, в состав входят органические и минеральные соединения ПИТАНИЕ, ДЫХАНИЕ, РОСТ И РАЗМНОЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ Питание бактерий Поступление в бактериальную клетку питательных веществ осуществляется несколькими способами и зависит от концентрации веществ, величины молекул, рН среды, проницаемости мембран и др. По типу питания микроорганизмы делятся на: автотрофы – синтезируют все углеродсодержащие вещества из СО2; гетеротрофы – в качестве источника углерода используют органические вещества; сапрофиты – питаются органическими веществами отмерших организмов; паразиты – живу за счет органических веществ живой клетки. Дыхание бактерий Дыхание, или биологическое окисление основано на окислительно-восстановительных реакциях, идущих с образованием молекулы АТФ. По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три основные группы: облигатные аэробы – могут расти только при наличии кислорода; облигатные анаэробы – растут на среде без кислорода, который для них токсичен; факультативные анаэробы – могут расти как при кислороде, так и без него. Рост и размножение бактерий Большинство прокариот размножаются бинарным делением пополам, реже почкованием и фрагментацией. Бактерии, как правило, характеризуются высокой скоростью размножения. Время деления клетки у различных бактерий колеблется довольно в широких пределах: от 20 минут у кишечной палочки до 14 часов у микобактерий туберкулеза. На плотных питательных средах бактерии образуют скопления клеток, называемые колониями. На жидких средах рост бактерий характеризуется образованием пленки на поверхности, равномерного помутнения либо осадка. ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ Важную роль в обмене веществ микроорганизмов играют ферменты. Различают: эндоферменты – локализуются в цитоплазме клеток; экзоферменты – выделяются в окружающую среду. Ферменты агрессии разрушают ткань и клетки, обусловливая широкое распространение микробов и их токсинов в инфицированной ткани. Биохимические свойства бактерий определяются составом ферментов: сахаролитические–расщепление углеводов; протеолитические – расщепление белков, липолитические – расщепление жиров, и являются важным диагностиче6ским признаком при идентификации микроорганизов. Для многих патогенных микроорганизмов оптимальными являются температура 37°С и рН 7,2-7,4. Пигменты бактерий. Многие микроорганизмы в процессе своей жизнедеятельности синтезируют пигменты, различающиеся по цвету, химическому составу и растворимости. Если пигменты нерастворимы в воде, окрашивается только колонии микроба, растущая на питательной среде, а если растворимы - окрашивается и питательная среда. Цвет пигмента используется в качестве теста для идентификации пигментообразующих бактерий. Пигменты обеспечивают: защиту от УФ радиации участвуют в реакциях синтеза обладают антибиотическим действием. ПРИНЦИПЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ Большинство бактерий и грибов культивируются на естественных и искусственных, плотных и жидких питательных средах, в оптимальных для них условиях. На питательных средах микроорганизмы при размножении образуют определенной морфологии колонии, что определяет их культуральные свойства. Идентификацию бактерий в исследуемом материале проводят на основании определения морфологических, биохимических, культуральных и других свойств микроскопическими, микробиологическими и другими методами исследования. Задания для самостоятельного выполнения: Доклад: «Химический состав клетки» Реферат:«Деление клетки». Схема- конспект: «Питание, дыхание, размножение, рост бактерий». Вопросы для самоконтроля:
Выполнение лабораторной работы: Приготовление простых питательных сред.
Тема 1.3. Экология микроорганизмов. Основные понятия и термины по теме:коли- титр, коли- индекс, микробное число, интерференция, фактериофагия, антибиотики, стерилизация, пастеризация, тиндализация, дезинфекция, антисептика, асептика. План изучения темы: 1.Распространение микробов в природе. Микрофлора почвы, воды, воздуха, организма животного, растений и кормов. 2.Влияние на микроорганизмы химических, физических и биологических факторов, их использование для уничтожения микрофлоры. 3.Методы стерилизации и дезинфекции. Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам Краткое изложение теоретических вопросов: Коли-индекс – количество кишечных палочек в 1 л. Воды, коли-титр – наименьшее количество воды в которой находится хотя ба одна кишечная палочка. Микробное число – общее число бактерий в одном мл.воды (путем высева на Агар в чашках Петри и последующего подсчета выросших колоний). Интерференция-это подавление жизнедеятельности одного вида микроба другим, фактериофагия- бактериофаги переводятся с греческого языка как "пожиратель бактерий". Они относятся к особым представителям царства вирусов, однако в отличие от других видов, бактериофаги умеют использовать бактериальные клетки для размножения. Эти микроскопические создания очень разнообразны и представляют собой крупнейшую из известных групп вирусов. На сегодняшний день бактериофаги включают в себя тринадцать семейств, которые делятся на сто сорок родов, а те в свою очередь содержат 5300 видов. Благодаря стараниям ученых и изобретению электронного микроскопа, мы можем в мельчайших деталях изучить их строение. Выяснилось, что большинство фагов имеют строение, более сложное, чем вирусы животных, растений и даже человека. Бактериофаги очень мелкие, неклеточные организмы. Средняя величина одного экземпляра 0,1-0,2 миллимикрона, а проще говоря, миллионные доли миллиметра, что составляет 1/100 часть от клетки обычной бактерии размером около пяти микрон. Внешний вид бактериофагов тоже непривычный. Среди них есть роскошные кристаллы, с четкими гранями, расположенные на ножках, словно космические корабли. Их стенки состоят из белковых молекул, а внутри расположена бесценная генная информация - дезоксирибонуклеиновая кислота и рибонуклеиновая кислота, или же ДНК и РНК. Где обитают бактериофаги? Среда обитания, как и морфология, бактериофагов очень разнообразна. Их можно встретить везде, где обитают бактерии - в земле, воздухе, воде, в атмосферных осадках, на предметах, одежде и еде, на шерсти животных и коже, а также внутри нашего организма. Словом, там, где много микроорганизмов, можно встретить много бактериофагов. Самым излюбленным местом обитания фагов является вода и почва с органическими удобрениями и чернозем. Пастеризация- обеззараживание объекта при 65-95 градусах в течении нескольких минут с последующим быстрым охлаждением до 10-12 градусов. Тиндализация-дробная стерилизация при которой материал прогревают в течении 2-7 дней на водяной бане при 56-75 градусах по 30-60 минут. Дезинфекция-комплекс мероприятий направленных на обеззараживание объектов внешней среды, обсемененных патогенной микрофлоры. Антисептика- уничтожение микробов с помощью химических дезинфицирующих веществ. Асептика- система мер по предотвращению попадания микробов в раны, ткани, органы, полости тела при лечебных, профилактических и диагностических манипуляциях. Задания для самостоятельного выполнения: Доклад: «Методы стерилизации и дезинфекции». Конспект: «Микрофлора почвы». Реферат: «Влияние на микроорганизмы химических, физических и биологических факторов». Презентация: «Экология микроорганизмов» Вопросы для самоконтроля по теме: 1.Какие факторы влияют на состав микрофлоры почвы? 2.Какие факторы влияют на состав микрофлоры воды? 3.Какие факторы влияют на состав микрофлоры воздуха ? 4.Какие факторы влияют на состав микрофлоры животного организма ? 5. Как действуют на микроорганизмы физические и химические факторы и вещества ? 6. Чем отличается коли- титр от коли- индекса ? 7. Что такое коли- индекс ? 8. Объясните явление фактериофагии. 9. Для чего проводится стерилизация? 10. Чем отличается пастеризация от тиндализации ? 11. Что такое антисептика и асептика? Выполнение лабораторной работы: Техника посева бактерий на питательных средах и их исследование. Тема 1.4.Взятие патологического материала. Основные понятия и термины по теме:патологический материал, гнойные истечения из органов и тканей, соскобы с пораженных участков тканей, мазок крови, паренхиматозные органы. План изучения темы: 1.Правила взятия патологического материала. Взятие крови для изготовления мазков при жизни животных и у трупов. 2.Взятие кала, трубчатых костей, кишечника. Правила отбора, доставки и хранения биоматериалов. Краткое изложение теоретических вопросов: Инструкция по забору материала для бактериологического исследования. Для получения достоверного результата анализ должен проводиться не менее чем через 2 недели после последнего приема антибиотиков и (или) антибактериальных препаратов. Заморозка материала не допускается. Материал доставляется в лабораторию в течение первых 3-4 часов после забора. Моча Утром после тщательного туалета наружных половых органов в стерильную посуду собирают порцию свободно выпущенной мочи в количестве 3-10 мл. Фекалии Материал собирается после естественной дефекации в подкладное судно (латок). Перед сбором материала лоток предварительно промывается проточной водой несколько раз, ополаскивается кипятком. Испражнения в количестве 5 грамм (из разных мест средней части) из судна (лотка) забирается в стерильный флакон. Истечения из глаз Гнойные истечения предварительно удаляют ватным тампоном, смоченным в стерильном физиологическом растворе. Забор материала производят вращательным движением стерильного аппликатора с ватным наконечником и помещают в стерильную пробирку с транспортной средой или в стерильную пробирку, взятую в лаборатории. Истечения из уха Гнойные истечения из ушной раковины и слухового прохода предварительно удаляют ватным тампоном, смоченным в стерильном физиологическом растворе, по направлению изнутри наружу. Забор материала производят из слухового прохода вращательным движением стерильного аппликатора с ватным наконечником и помещают в стерильную пробирку с транспортной средой или в стерильную пробирку, взятую в лаборатории. Истечения из раны Гнойные истечения и корочки следует удалить ватным тампоном, смоченным в стерильном физиологическом растворе, по направлению от центра к периферии. Забор материала производят вращательным движением стерильного аппликатора с ватным наконечником и помещают в стерильную пробирку с транспортной средой или в стерильную пробирку, взятую в лаборатории. Истечения из влагалища (у сук) и препуция (у кобелей) Утром после тщательного туалета наружных половых органов, тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором, производят забор материала вращательным движением стерильного аппликатора с ватным наконечником и помещают в стерильную пробирку с транспортной средой или в стерильную пробирку, взятую в лаборатории. Истечения из носа Гнойные истечения и (или) корочки предварительно удаляют ватным тампоном, смоченным в стерильном физиологическом растворе по направлению изнутри наружу. Забор материала производят вращательным движением стерильного аппликатора с ватным наконечником и помещают в стерильную пробирку с транспортной средой или в стерильную пробирку, взятую в лаборатории. Соскобы с пораженных участков кожи В лабораторию необходимо отправлять соскобы эпидермиса из очага поражения и корки с периферии очага, а также отделяемое содержимое при его наличии. При множественности очагов отбор следует проводить отдельно из очагов расположенных на разных участках тела. Материал отбирают в стерильные пробирки, взятые в лаборатории. Патологический материал необходимо брать специальными инструментами в стерильную посуду. Патматериал должен быть взят как можно раньше после смерти животного, особенно в теплое время года. Начавшееся разложение трупа может сделать его непригодным для исследования. Консервированный (30%-ный водный раствор химически чистого глицерина или стерильное вазелиновое масло) или замороженный патматериал отправляют в том случае, если невозможно доставить его в лабораторию в течение ближайших 24-30 часов. Материал от животных, подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть тщательно упакован, опломбирован или опечатан. На каждый отправляемый материал заполняют сопроводительный документ по соответствующей форме, где указывают вид, пол и возраст животного, его инвентарный номер или кличку, кому принадлежит, перечисляют наименование направляемых органов, указывают вид исследования, краткое описание клинических признаков и патологоанатомических изменений. Указывают дату заболевания животного, дату падежа или вынужденного убоя, предположительный диагноз, какие болезни исключить, дату отправки материала, подпись врача с расшифровкой и печать. Сибирская язва. Направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, полученной из надреза уха; от трупов свиней – участки отечной соединительной ткани и заглоточные, подчелюстные, а также другие лимфатические узлы, в которых имеются характерные патологоанатомические изменения. Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Место отреза уха на трупе прижигают. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки. Шерсть - не менее 10 образцов массой около 2 г каждый из разных мест упаковки. Образцы объединяют и упаковывают вместе. Почва - обследуемую площадь разбивают на квадратные участки (сторона каждого не более 4 м). Почвенным буром отбирают пробу массой 20-30 г по углам и в центре каждого участка. Вода - с поверхности и дна. Объем каждой пробы не менее 0,5л общий объем не менее 1л. Бруцеллез. Абортированный плод с плодовыми оболочками (от свиноматок берут не менее 3-х плодов) или селезенку, печень, желудок плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и 12-ти перстной кишки, и околоплодную жидкость. Жидкий материал берут в стерильную посуду. Туберкулез. От млекопитающих - лимфатические узлы: заглоточные, подчелюстные, бронхиальные, средостенные, брыжеечные; лимфатические узлы, взятые в области илеоцекального соединения и подвздошной кишки упаковывают отдельно от остальных лимфатических узлов. Портальные, предлопаточные, надвыменные, поверхностные паховые лимфатические узлы и внутренние органы (легкие, печень, почки) направляют только при наличии туберкулезных изменений. Парные лимфатические узлы отбирают оба. Трупы птиц направляют целиком. Колибактериоз (отечная болезнь). Для посмертной диагностики от телят, ягнят и поросят - долю печени с желчным пузырем; сердце, перевязанное лигатурой, селезенку, пораженный участок тонкого отдела кишечника, перевязанный с двух концов лигатурой, с 2-3 пакетами регионарных лимфатических узлов, трубчатую кость. Кишечник вместе с регионарными лимфатическими узлами упаковывают отдельно в полиэтиленовый пакет. Для прижизненной диагностики - фекалии больных диареей животных (не менее чем от 5 животных с одной фермы). Пробы массой 1-2 г от каждого больного животного берут во время дефекации или из прямой кишки в стерильные пробирки. Для диагностики колибактериоза птиц направляют из неблагополучных птичников по 3-5 свежих трупа. Листериоз. Трупы мелких животных, от крупных паренхиматозные органы (часть печени, селезенку, почку, пораженные участки легких), абортированный плод. Пастереллез. Трупы мелких животных, птиц, от крупных паренхиматозные органы (часть селезенки, печени, почек), сердце с перевязанными сосудами, трубчатую кость. При поражении легких - кусочки на границе нормального и измененного участков, миндалины, бронхиальные, средостенные и заглоточные лимфатические узлы. Сальмонеллез. Фекалии, мочу, трупы мелких животных, эмбрионы птиц и павшую птицу, абортированные плоды с плодовыми оболочками и околоплодной жидкостью, от крупных паренхиматозные органы (печень с желчным пузырем и лимфатическими узлами, селезенку, почку), мезентериальные лимфатические узлы, трубчатую кость, сердце, перевязанное лигатурой. Для установления сальмонеллоносительства - печень, селезенку, фолликулы. Стафилококкоз, стрептококкоз. Трупы мелких животных, птиц, от крупных паренхиматозные органы (часть селезенки, печени, почек), легкое, сердце с перевязанными сосудами, трубчатую кость, пораженные суставы, абортированные плоды, истечения из шейки матки, содержимое абсцессов, синовиальную жидкость из воспаленных суставов. Рожа (эризипелоид) свиней. Для исследования направляют трубчатую кость, селезенку, печень, почку, легкое, сердце от 2-3 трупов синей. Дизентерия. Стекла с мазками для микроскопического исследования. Стекла заворачивают в пергаментную бумагу. Для посмертной - слизистая оболочка большой ободочной кишки павших или убитых с диагностической целью свиней. Пищевые токсикоинфекции. Часть мышцы сгибателя или разгибателя передней и задней конечностей длиной не менее 8см или кусок другой мышцы размером не менее 8х6х6см; лимфатические узлы – поверхностный шейный или собственно подкрыльцовый и наружный подвздошный вместе с окружающей их соединительной и жировой тканью, а от свиней - поверхностный шейный или подкрыльцовый первого ребра и надколенный; долю печени и желчным пузырем, почку и селезенку. Кампилобактериоз. От коров, нетелей и овцематок - слизь из шейки матки, стерильно взятую в первые 3-4 дня после аборта (при отсутствии гнойных выделений из матки) или в период охоты. Слизь берут также от животных, у которых наблюдается расстройство полового цикла, также в период охоты. От быков - препуциальную слизь, сперму, секрет придаточных половых желез, взятые с соблюдением стерильности. Сперму от быков берут при помощи искусственной вагины. Секрет придаточных половых желез получают путем массажа через прямую кишку. Пробы слизи берут стерильным марлевым тампоном при помощи специальных инструментов. Тампоны со слизью помещают в пробирки с 3-5 мл стерильного физ. раствора и доставляют не позднее чем через 6 ч после взятия. Сап. Подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, средостенные лимфатические узлы, носовую перегородку, гортань, глотку, трахею а также измененные участки легкого, печени, селезенки, кожи с подкожной клетчаткой. Эмкар. Кусочки пораженных мышц, экссудат из крепитирующего отека. Пораженный участок разрезают в глубину и из средней части мышцы отбирают кусочки пораженной ткани. В случае вскрытия трупа берут также кусочки печени, селезенки и кровь сердца. Контагиозный метрит лошадей. От нежеребых кобыл - слизь из шейки матки, взятая в период половой охоты, от жеребых кобыл – слизь из клиторной ямки; от жеребцов – слизь из уретрального канала. Для получения проб цервикальной слизи стерильную полистироловуюосеменительную пипетку соединяют со шприцем при помощи резиновой трубки длиной 2-3 см и набирают 2 мл стерильного физ. раствора. Пипетку вводят через зеркало в канал шейки матки на глубину 2-3 см, впрыскивают раствор и насасывают его обратно вместе с маточно-цервикальной слизью. Пробу сливают в пробирку с 3 мл стерильного физ. раствора. Можно пользоваться приборами Павловского, Жабоедова или шприцем-катетером для искусственного осеменения коров. От жеребых кобыл во избежание аборта пробы отбирают из клиторной ямки с помощью стерильного марлевого тампона без помощи зеркала. Тампон помещают в пробирку с 3 мл стерильного физ. раствора. От жеребцов пробы берут стерильным марлевым тампоном из уретрального канала с помощью пинцета. Тампон помещают в пробирку с 3 мл стерильного физ. раствора. Некробактериоз. Пораженные копыта вынужденной убитых и павших животных, не подвергавшихся лечению, соскобы или кусочки пораженных тканей копыт, внутренних органов с участками на границе пораженных и здоровых тканей. Злокачественный отек. Для исследования направляют кусочки пораженных мышц, тканевой экссудат и паренхиматозные органы, а от трупов овец, кроме того, направляют часть сычуга и тонкого отдела кишечника с содержимым. Мастит коров. Молоко отбирают из четвертей вымени реагирующих на тест – мастидин или димастин и дающих положительную пробу отстаивания с соблюдением правил асептики. Отбирают 5-10 мл альвеолярного молока в конце дойки. Доставка должна осуществляться в течение 3-4 часов с момента взятия проб в специальных емкостях, обеспечивающих температуру не выше 80-100С, или в термосе со льдом. Бактериальные болезни пчел. (Американский и европейский гнилец, парагнилец, септицемия, сальмонеллез, порошковидный расплод) Образцы сотов размером 10х15 см с больными и погибшими личинками. Образцы помещают в деревянный ящик, отделяя их друг от друга и от стенок деревянными планками. Соты нельзя обертывать бумагой. Заплесневевший материал для исследования не пригоден. Цитробактериоз пчел - по 50 живых пчел или трупов свежего подмора от каждой больной пчелиной семьи. При гибели пчелиных семей не менее 50 трупов пчел из верхнего слоя подмора. Пчел помещают в стеклянные банки, закрытые тремя слоями марли. Бактериальные болезни рыб. (Аэромоноз или краснуха карпов, аэромоноз или фурункулез лососевых, вибриоз рыб, флексибактериоз рыб, псевдомоноз рыб.) Не менее 5 живых рыб с признаками болезни. Рыба с признаками хронического течения заболевания для исследования на аэромоноз или краснуху карпов не пригодна. Вода. Пробу отбирают из пробоотборного крана. Не допускается использовать водораспределительные сетки, шланги, насадки и т.п. Кран стерилизуется путем обжига. Перед отбором воду сливают не менее 10 минут при полностью открытом кране. Перед отбором напор воды может быть уменьшен. Используют стеклянные емкости (500 см3) с плотно закрывающимися пробками (стеклянными, силиконовыми или из других материалов, не оказывающих влияния на жизнеспособность микроорганизмов) с защитным колпачком. Допускается использовать для отбора проб одноразовые стерильные емкости. Пробу отбирают с соблюдением стерильности. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать емкости не допускается. Если через пробоотборный кран происходит постоянный слив воды, отбор производят без предварительной стерилизации крана, не изменяя напор воды и существующей конструкции крана. Пробу маркируют и сопровождают документом отбора проб воды с указанием места, даты, времени забора, фамилии специалиста, отбиравшего пробу, и другой информации. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре (4 - 10) °С. В холодный период года контейнеры должны быть снабжены термоизолирующими прокладками, обеспечивающими предохранение проб от промерзания. При соблюдении указанных условий срок начала исследований от момента отбора проб не должен превышать 6 ч. Если не может быть соблюдено время доставки пробы и температура хранения, анализ пробы проводить не следует. Смывов. Смывы берут стерильными ватными или марлевыми тампонами, закрепленными на проволоке в пробке пробирок. Перед взятием смыва тампон погружают в жидкость. После взятия смыва пробку с тампоном вновь вставляют в пробирку, так чтобы тампон погрузился в раствор. Отобранные пробы маркируют и сопровождают документом отбора проб. Сопроводительный документ должен быть составлен в 2-х экземплярах и в нем должна присутствовать опись проб. Транспортировка пробирок осуществляется в строго вертикальном положении в пенале. Трупы Для бактериологического исследования принимаются трупы мелких домашних животных и трупы мелких птиц массой не более 3-х кг (котята, щенки, мелкие грызуны, попугай, голуби, кролики). Павшее животное необходимо предоставить в лабораторию в течение 2-3 часов после смерти. При невозможности быстрой доставки труп замораживают при -200С. Последующая транспортировка осуществляется в замороженном состоянии. Труп животного предоставляется в лабораторию в непроницаемой таре (толстый целлофановый пакет) для того чтобы исключить распространение возможной инфекции. Также необходимо предоставить сопроводительное письмо со следующими данными: - возраст животного - вид животного - время смерти - клинические признаки (если животное болело) - если проводилось лечение, то указать какое и какими лекарственными средствами. Задания для самостоятельного выполнения:
Вопросы для самоконтроля по теме:
Выполнение практического задания: 1.Упаковка и пересылка патологического материала. 2.Оформление сопроводительной документации. Раздел 2 Общая эпизоотология |